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熒光原位雜交(FISH)濾光片
- 產(chǎn)品型號：
- 更新時間：2024-04-11
- 產(chǎn)品介紹：熒光原位雜交(FISH）熒光原位雜交 (Fluorescence In Situ Hybridization, FISH) 是指利用熒光染料標記的，已知序列的單鏈核酸作為探針，通過堿基互補配對原則，與待檢樣品中核酸進行特異性結(jié)合，然后通過觀察熒光信號，從而對樣品中待檢核酸進行定性，定量及定位分析。FISH 有快速，信號強，特異性高以及可以多重染色等特點，廣泛應(yīng)用于產(chǎn)前診斷，基因組結(jié)構(gòu)分析等領(lǐng)域。
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產(chǎn)品介紹
| 品牌 | 其他品牌 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,電子,綜合 |
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熒光原位雜交(FISH)
熒光原位雜交 (Fluorescence In Situ Hybridization, FISH) 是指利用熒光染料標記的，已知序列的單鏈核酸作為探針，通過堿基互補配對原則，與待檢樣品中核酸進行特異性結(jié)合，然后通過觀察熒光信號，從而對樣品中待檢核酸進行定性，定量及定位分析。FISH 具有快速，信號強，特異性高以及可以多重染色等特點，廣泛應(yīng)用于產(chǎn)前診斷，基因組結(jié)構(gòu)分析等領(lǐng)域。
影響FISH 結(jié)果的因素有很多，包括樣品準備和處理，顯微鏡，光源，熒光探針以及濾光片。FISH 通?；跓晒怙@微鏡來觀測信號，所用濾光片包括激發(fā)片，二向色鏡和發(fā)射片三種。其工作原理如下圖所示:
l 激發(fā)片：選擇透過光源某部分波段的光，用來激發(fā)熒光探針；
l 二向色鏡：反射光源的光至樣品，透過產(chǎn)生的熒光并反射激發(fā)光的散射光；
l 發(fā)射片：選擇透過熒光的某部分波段的光至檢測器或人眼，并可以阻擋掉激發(fā)光的雜散光。
在 FISH 實驗中，濾光片帶寬的大小會對 FISH 圖像的對比度產(chǎn)生重要的影響。增加帶寬會提高激發(fā)和接收效率，使接收的信號增強。但實際接收的信號中同時包含了探針的熒光信號和樣品的背底噪音，帶寬的增加會同時增加這兩者的強度。帶寬減小，雖然可以降低背底噪音的強度，但熒光信號也會隨之減弱 。所以對于對比度要求很高的FISH 實驗，針對于每種具體的染料，都會存在一個*的帶寬，使 FISH 圖像能夠達到*的對比度。FISH 濾光片的帶寬都是根據(jù)常用的 FISH 染料做過優(yōu)化，可以為用戶的 FISH 實驗提供*的圖像對比度。
"B" 的信號比"A" 多91%, 但是“B" 的噪音比“A" 多226%。“A"具有更好的對比度！
FISH 濾光片組具有以下特點 :
l 高透過率、高截止深度和高光譜陡度；
l 保證足夠亮度的同時，提供*的圖像對比度；
l 消除串色的影響；
a. 消除Gold 和Aqua 串色到Green 通道；
b. 消除Gold 和Orange 串色到Red 通道；
l 對多波段濾光片組中的DAPI 通道進行特殊處理，避免DAPI 信號過強而將其他通道信號掩蓋；
l 多色圖像疊加零漂移；
l 磁控濺射鍍膜，終身質(zhì)保。
ET 系列 - FISH 單波段帶通濾光片組
濾光片組 | 激發(fā)片 CWL/FWHM | 二向色鏡 50% cut-on | 發(fā)射片 CWL/FWHM | FISH 探針 | 備注 |
49000 | 350/50 | 400 | 460/50 | DAPI |
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49028 | 395/25 | 425 | 460/50 | DAPI | 用于 395 nm 光源 |
49301 | 405/10 | 425 | 460/36 | Blue |
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49302 | 436/20 | 455 | 480/30 | Aqua |
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49303 | 495/25 | 515 | 537/29 | Green | 用于有 Aqua，無 Gold 時 |
49308 | 485/25 | 505 | 525/30 | Green | 用于無 Aqua，有 Gold 時 |
49312 | 490/20 | 505 | 525/20 | Green | 用于有 Aqua，有 Gold 時 |
49313 | 490/20 | 505 | 520/20 | Green | Ventanta FISH 或免疫熒光 |
49304 | 546/10 | 556 | 572/23 | Gold |
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49305 | 546/22 | 565 | 590/33 | Orange | 用于無 Red 時 |
49309 | 539/21 | 556 | 576/31 | Oange | 用于有 Red 時 |
49306 | 580/25 | 600 | 625/30 | Red | 用于無 Gold，無 Orange 時 |
49310 | 592/21 | 610 | 630/30 | Red | 用于有 Gold，無 Orange 時 |
49311 | 599/13 | 612 | 632/28 | Red | 用于有 Orange 時 |
49307 | 630/20 | 647 | 667/30 | Far Red |
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49009 | 640/30 | 660 | 690/50 | Far Red |
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ET 系列 - FISH 多波段濾光片組
DAPI 是一種能夠與DNA雙鏈特異性結(jié)合的有機熒光染料。在 FISH 實驗中，DAPI 主要用來對整個細胞核進行染色成像，這就導(dǎo)致了 DAPI 的濃度要遠高于其他 FISH 探針的濃度。而在有些 FISH 實驗流程中，DAPI 是在最后一步進行染色，染色之后也沒有清洗的步驟。
在使用多波段濾光片進行多色 FISH 實驗中，為了避免DAPI 的信號將其他 FISH 探針的信號掩蓋，在 多波段濾光片組中，會刻意降低激發(fā)片在 DAPI 處的透過率，從保證 DAPI 的信號不至于過高（見下圖）。
DAPI 和 Aqua 的發(fā)射峰高度重疊，通常情況下同時做兩種探針的成像會很困難，因為大量的 DAPI 信號會將 Aqua 信號掩蓋掉。
69014 濾光片組，通過降低 DAPI 的激發(fā)效率，能夠?qū)崿F(xiàn)DAPI，Aqua，Green 和 Orange 四色的同時觀察。 DAPI 和Aqua 采用不同的激發(fā)波段，但共享同一個接收通道（見下圖）。
ET 系列 - FISH 多波段濾光片組
濾光片組 | FISH 探針 | ||||||
DAPI | Aqua | Green | Gold | Orange | Red | Far Red | |
59001v2 | • |
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59002v2 | • |
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59003v2 | • |
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59010 |
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59011 |
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59012 |
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59033 |
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69008 |
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69011 |
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69013v2 | • |
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69014 | • | • | • |
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69015 | • |
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89084v | • |
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8908 | • |
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1. 為保證 Green 和 Orange 強度接近，59011 適用于汞燈和鹵素燈光源，59012 適用于 LED 光源；
2. 含一個雙波段激發(fā)片，用于同時激發(fā) Green 和 Orange；一個三波段激發(fā)片，用于同時激發(fā) DAPI，Green 和 Orange；三個單波段激發(fā)片，用于 分別激發(fā) DAPI，Green 和 Orange；
3. 含一個雙波段激發(fā)片，用于同時激發(fā) Green 和 Red；一個三波段激發(fā)片，用于同時激發(fā) DAPI，Green 和 Red；三個單波段激發(fā)片，用于分別 激發(fā) DAPI，Green 和 Red。
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